O milho tem grande importância socioeconômica por ter o cultivo universalizado, que se dá tanto no agronegócio como na agricultura familiar. Diante deste aspecto, o resgate e conservação das sementes crioulas tem grande relevância para a manutenção de variedades resistentes, muito adaptadas para várias regiões e sem exigir pacote tecnológico de alto custo. O Objetivo da pesquisa foi avaliar a qualidade fisiológica do milho crioulo preto. O trabalho foi conduzido no laboratório de sementes do Centro Universitário de Palmas (CEULP/ULBRA), no qual foram utilizadas sementes produzidas em três cidades diferentes do país, sendo estas: Botucatu-SP, Araçariguama-SP e PalmasTO. As sementes foram submetidas aos testes de determinação do grau de umidade, padrão de germinação, comprimento de raiz e de frio. Observou-se que a amostra produzida em Botucatu apresentou maior potencial de germinação, tanto ao teste padrão e de frio, quanto ao teste de comprimento de raiz, as sementes produzidas em Palmas tiveram um menor desenvolvimento radicular